پیوندهای مفید
اخبار و اعلانات
آمار
| تعداد نشریات | 43 |
| تعداد شماره‌ها | 1,673 |
| تعداد مقالات | 13,654 |
| تعداد مشاهده مقاله | 31,560,448 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 12,467,981 |
ردیابی شایع ترین ژن های مقاومت آنتی بیوتیکی در ایزوله های اسینتوباکتر بومانی جدا شده از عفونت های بیمارستانی و بررسی الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی در آن ها | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| زیست شناسی میکروبی | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| مقاله 8، دوره 4، شماره 14، شهریور 1394، صفحه 71-82 اصل مقاله (248.36 K) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| نوع مقاله: پژوهشی- فارسی | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| نویسندگان | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| مرضیه توکل* 1؛ حسن ممتاز2 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1کارشناس ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد اشکذر، اشکذر، ایران | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 2دانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد، شهرکرد، ایران | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| چکیده | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| مقدمه: اسینتو باکتر بومانی یک کوکوباسیل گرم منفی است که در طبیعت انتشار وسیعی داشته و به عنوان یکی از عوامل مهم عفونتهای بیمارستانی محسوب میشود. به واسطه ایجاد مقاومتهای آنتیبیوتیکی در این باکتری، مشکلات فراوانی در درمان موفقیت آمیز بیماران و در پی آن مرگ و میر آنها ایجاد شده است. مطالعه حاضر با هدف ردیابی شایعترین ژنهای کد کننده مقاومت آنتیبیوتیکی در ایزولههای اسینتو باکتر بومانی جدا شده از عفونتهای بیمارستانی انجام شده است. مواد و روشها: این مطالعه توصیفی در دو بیمارستان شهر تهران بر روی 121 ایزوله اسینتوباکتر بومانی جدا شده از عفونتهای بالینی انجام شد. پس از شناسایی ایزولهها با استفاده از روشهای بیوشیمیایی، الگوی مقاومت آنتیبیوتیکی ایزولهها به دو روش انتشار دیسک و روش مولکولی (برای ردیابی ژنهای کد کننده مقاومت آنتیبیوتیکی) تعیین شد. نتایج: از تعداد 121 ایزوله اسینتوباکتر بومانی جدا شده از نمونههای عفونی، بیشترین مقاومت به آنتیبیوتیک تتراسایکلین با فراوانی 90/90 درصد و بیشترین حساسیت به آنتیبیوتیکهای کلرامفنیکل، نیتروفورانتوئین و مروپنم با فراوانی 65/1 درصد مشاهده شد. فراوانی حضور ژنهای dfrA1، tet (A)، aac (3) - IV، sul1، tet (B)، aadA1، qnr، CITM، blaSHV، sim، vim، Oxa-58-like، Oxa-24-like، imp، Oxa-51-like، Oxa-23-like، cat1، cmlAبه ترتیب 79 (28/65 درصد)، 71 (67/58 درصد)، 68 (19/56 درصد)، 67 (37/55 درصد)، 44 (36/36 درصد)، 41 (88/33 درصد)، 29 (96/23 درصد)، 28 (14/23 درصد)، 24 (83/19 درصد)، 17 (04/14 درصد)، 16 (22/13 درصد)، 14 (57/11 درصد)، 12 (91/9 درصد)، 10 (26/8 درصد)، 9 (43/7 درصد)، 8 (61/6 درصد)، 5 (13/4 درصد) و 3 (47/2 درصد) بود. بحث و نتیجه گیری: وجود مقاومت آنتیبیوتیکی چندگانه در ایزولههای مورد مطالعه، استفاده از روشهای مولکولی در کنار آزمون آنتی بیوگرام برای انتخاب مؤثرترین آنتیبیوتیک در درمان عفونت و لزوم برقراری نظام مراقبت آنتیبیوتیکی به منظور موفقیت در برنامه کنترل عفونت را در آینده نشان میدهد. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| کلیدواژه‌ها | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| اسینتو باکتر بومانی؛ عفونت های بیمارستانی؛ الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی؛ ژنهای کدکننده مقاومت آنتی بیوتیکی | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| اصل مقاله | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
. مقدمه اسینتوباکترها کوکوباسیلهای گرم منفی و هوازی اجباری هستند که زندگی در محیطهای مرطوب را ترجیح میدهند (1). مهمترین گونه از این جنس اسینتوباکتر بومانی است که عامل بیماریهای مختلفی از قبیل پنومونی، سپتی سمی، عفونتهای دستگاه ادراری، عفونتهای پوستی و زخم، مننژیت و اندوکاردیت میباشد (2 و 3). میزان کلونیزاسیون اسینتوباکتر بومانی در افراد بستری شده در بیمارستان به ویژه در آنهایی که مدت بستری شدنشان به درازا کشیده و یا درمان آنتیبیوتیکی وسیع و یا درمان ضد سرطان دریافت داشتهاند، در حال افزایش است (4 و 5). یکی از مشکلات موجود در مورد اسینتوباکتر بومانی ظهور سویههایی با مقاومت چند دارویی است که به کلاسهای مختلف آنتیبیوتیکها نظیر بتالاکتامها، آمینوگلیکوزیدها و فلوروکینولونها مقاوماند (3). این مقاومتها بیشتر با واسطه ژنهایی انجام میشود که بر روی عناصر ژنتیکی متحرک مثل ترانسپوزونها و اینتگرونها قرار داشته و به سادگی در میان باکتریها انتشار مییابند (6). مقاومت به آمینوگلیکوزیدها توسط ژنهای aacC1(استیل ترانسفرازی را کد میکند که باعث مقاومت به جنتامایسین میشود)، ژن aadA1 (آدنیل ترانسفرازی را کد میکند که باعث مقاومت به استرپتومایسین و اسپکتینومایسین میشود)، ژن aadB (آدنیل ترانسفرازی را کد میکند که باعث مقاومت به جنتامایسین، توبرامایسین و کانامایسین میشود) و ژن aphA6 (فسفوترانسفرازی را کد میکند که باعث مقاومت به جنتامایسین، آمیکاسین، کانامایسین و نئومایسین میشود). مقاومت به پنی سیلینها و سفالوسپورینها از طریق آنزیم بتالاکتامازی است که توسط ژن ADC7 و یا ژن OXAset کد میشود (7). به نظر میرسد عوامل ضد میکروبی جدیدی که بتواند در مقابل این باکتری فعالیت مؤثر داشته باشند در آینده نزدیک در دسترس نباشد که این موضوع اهمیت فعالیت عوامل ضد میکروبی رایج را بیشتر میکند. مطالعه حاضر با هدف ردیابی شایعترین ژنهای کدکننده مقاومت آنتیبیوتیکی در ایزولههای اسینتو باکتر بومانی جدا شده از بیماران بستری در دو بیمارستان بزرگ شهر تهران و تعیین الگوی حساسیت آنتیبیوتیکی این ایزولهها انجام گرفت.
. مواد و روشها ایزولههای باکتریایی: در این مطالعه توصیفی- مقطعی، 500 نمونه بالینی شامل خون (98 نمونه)، خلط (141 نمونه)، ادرار (92 نمونه)، چرک (134 نمونه) و مایع مغزی نخاعی (35 نمونه) از بیماران بستری در بیمارستانهای پیامبران و بقیة اله (عج) تهران طی مدت 6 ماه (اسفند91 تا شهریور 92) جداسازی و به آزمایشگاه انتقال داده شد. در آزمایشگاه هر نمونه روی محیطهای مک کانکی آگار و بلاد آگار کشت داده و به مدت 24 ساعت در 37 درجه سانتیگراد انکوبه شد. پس از 24 ساعت، با آزمایش مستقیم (رنگ آمیزی گرم) وجود کوکوباسیلهای گرم منفی اسینتوباکتر به روش میکروسکوپی تایید شد. سپس، برای تشخیص گونههای مختلف اسینتو باکتر تستهای بیوشیمیایی IMVIC، اوره آز، TSI، OF، MRVP، SIM، کاتالاز و اکسیداز و رشد در 37 و 42 درجه سانتیگراد انجام شد. ایزولههایی که دارای واکنش لاکتوز منفی، غیر متحرک، اکسیداز منفی، کاتالاز مثبت، اندول منفی، پیگمان منفی، اوره آز مثبت، سیترات مثبت، H2S منفی، MR منفی وVP منفی بودند به عنوان اسینتو باکتر بومانی جداسازی شد و در منفی70 درجه سانتیگراد در محیط پپتون واتر که حاوی 30 درصد گلیسرول، نگه داری شد. به منظور تایید قطعی اسینتو باکتر بومانی در ایزولههای مورد مطالعه، از آزمایش PCR در حضور زوج پرایمرهای نشان داده شده در جدول 1 (با ردیابی ژن 16S-23S ribosomal DNA) استفاده شد. واکنش PCR در حجم 25 میکرولیتر واجد 5/2 میکرولیتر بافر با غلظت 10 برابر[1]، 5/1 میلیمولکلرید منیزیم[2]، 100 میکرومول dNTP mix، 1 واحد آنزیم پلی مراز[3] (فرمنتاس- لیتوانی)، 1 میکرومول از زوج پرایمرهای F و R و 2 میکرولیتر از DNA مربوط به هر ایزوله تنظیم شد. برنامه حرارتی مورد استفاده در این مرحله شامل یک سیکل 94 درجه سانتیگراد به مدت 3 دقیقه، 30 سیکل تکراری 95 درجه سانتیگراد به مدت 40 ثانیه، 59 درجه سانتیگراد به مدت 55 ثانیه، 72 درجه سانتیگراد به مدت 60 ثانیه و سیکل انتهایی 72 درجه سانتیگراد به مدت 6 دقیقه بود. وجود قطعه 208جفت بازی تکثیر یافته در این واکنش نشانگر وجود اسینتو باکتر بومانی در کلونیهای مورد مطالعه بود (8). .آزمون تعیین حساسیت و مقاومت ایزولهها نسبت به آنتیبیوتیکها: مقاومت نسبت به آنتیبیوتیکها با استفاده از دیسکهای آنتیبیوتیکی ساخت شرکت پادتن طب، ایران، بر اساس دستورالعمل 2010 [4]CLSI و مطالعات مشابه و با استفاده از روش انتشار دیسک در محیط مولر هینتون آگار ارزیابی شد (7، 9، 10 و 11). شایان ذکر است از سویه استاندارد اشریشیا کلی ATCC 25922 به عنوان کنترل منفی کیفیت آنتی بیوگرام و سویه استاندارد اسینتوباکتر بومانی ATCC 19606 به عنوان کنترل مثبت کیفیت آنتی بیوگرام استفاده شد. آنتیبیوتیکهای آزمون شده شامل: تتراسایکلین (30 میکروگرم/ دیسک)، سفتازیدیم (30 میکروگرم/ دیسک)، سیپروفلوکساسین (30 میکروگرم/ دیسک)، کوتریموکسازول (25/1/ 75/23 میکروگرم/ دیسک)، توبرامایسین (10 میکروگرم/ دیسک)، کلرامفنیکل (30 میکروگرم/ دیسک)، نورفلوکساسین (10 میکروگرم/ دیسک)، آمیکاسین (30 میکروگرم/ دیسک)، جنتامایسین (10 میکروگرم/ دیسک)، ریفامپین (5 میکروگرم/ دیسک)، سفالوتین (30 میکروگرم/ دیسک)، استرپتومایسین (10 میکروگرم/ دیسک)، تری متوپریم (5 میکروگرم/ دیسک)، لووفلوکساسین (5 میکروگرم/ دیسک)، ایمی پنم (10 میکروگرم/ دیسک)، مروپنم (10 میکروگرم/ دیسک)، نیتروفورانتوئین (300 میکروگرم/ دیسک)، آزیترومایسین (15 میکروگرم/ دیسک) و اریترومایسین (15 میکروگرم/ دیسک) بودند. در این روش سوسپانسیون باکتری با کدورت معادل 5/0 مک فارلند بر روی محیط مولر هینتون آگار تلقیح شد. پس از گذاشتن دیسکها در محیط کشت و 24 ساعت انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتیگراد، قطر هاله عدم رشد برای هر آنتیبیوتیک مطابق با دستورالعمل مربوطه به عنوان حساس و مقاوم ثبت شد. .ردیابی ژنهای کدکننده مقاومت آنتیبیوتیکی: برای ردیابی شایعترین ژنهای کدکننده مقاومت آنتیبیوتیکی شامل ژنهای aadA1(کدکننده مقاومت به استرپتومایسین)، aac (3) -IV(کدکننده مقاومت به جنتامایسین) ، sul1(کدکننده مقاومت به سولفونامید)، blaSHV و CITM(کدکننده مقاومت به بتالاکتام)، cat1 و cmlA(کدکننده مقاومت به کلرامفنیکل)، tet (A) وtet (B) (کدکننده مقاومت به تتراسایکلین) ، dfrA1(کدکننده مقاومت به تری متوپریم)، qnr(کدکننده مقاومت به کوئینولون)، impو vimوsim (کدکننده مقاومت به کربنی سیلین)، Oxa-51-like، Oxa-23-like Oxa-24-like، Oxa-58-like (کدکننده مقاومت به اگزاسیلین)، از زوج پرایمرهای نشان داده شده در جدول 1 به روش PCR استفاده شد. برای این منظور ابتدا DNA ژنومی از ایزولههای اسینتو باکتر بومانی جدا شده در مرحله قبل با استفاده از کیت استخراج [5] DNA ساخت شرکت فرمنتاس- لیتوانی[6] استخراج و بسته به اندازه قطعات ژنی مورد مطالعه در چند مرحله به روش DNA چندگانهای آزمایش شد: برای ردیابی ژنهای aadA1، aac (3) -IV، sul1، blaSHV، CITM، cat1، cmlA، tet (A)، tet (B) ، dfrA1 وqnr واکنش PCR چندگانه ای[7] در حجم 50 میکرولیتر واجد 5 میکرولیتر بافر با غلظت 10 برابر، 2 میلیمول کلرید منیزیم، 150 میکرومول dNTP mix، 5/0 میکرومول از زوج پرایمرهایF و R (مربوط به هر ژن)، 5/1 واحد آنزیم پلی مراز و 2 میکرولیتر از DNA مربوط به هر نمونه تنظیم شد. برنامه حرارتی مورد استفاده برای تکثیر قطعات ژنی فوق شامل یک سیکل 94 درجه سانتیگراد به مدت 6 دقیقه، 33 سیکل تکراری 95 درجه سانتیگراد به مدت 70 ثانیه، 55 درجه سانتیگراد به مدت 65 ثانیه، 72 درجه سانتیگراد به مدت 90 ثانیه و یک سیکل انتهایی 72 درجه سانتیگراد به مدت 8 دقیقه بود (12- 15). ردیابی سه ژن imp، vim و sim در یک واکنش PCR چندگانه ای به حجم 50 میکرولیتر واجد 5 میکرولیتر بافر با غلظت 10 برابر، 5/1 میلیمول کلرید منیزیم، 100 میکرومول dNTP mix، 1 میکرومول از زوج پرایمرهای F و R مربوط به هر ژن، 1 واحد آنزیم پلی مراز و 5/2 میکرولیتر از DNA مربوط به هر نمونه با برنامه حرارتی زیر انجام شد: یک سیکل 95 درجه سانتیگراد به مدت 4 دقیقه، 30 سیکل تکراری 94 درجه سانتیگراد به مدت 45 ثانیه، 58 درجه سانتیگراد به مدت 60 ثانیه، 72 درجه سانتیگراد به مدت 40 ثانیه و یک سیکل انتهایی 72 درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه (16). به منظور ردیابی ژنهای کدکننده مقاومت به اگزااسیلین برای تکثیر قطعات ژنی مورد مطالعه از دستگاه ترموسایکلر [8] استفاده شد. به منظور ردیابی قطعه ژنی تکثیر یافته در PCR از الکتروفورز محصول PCR روی ژل آگاروز استفاده شد. در این مرحله 15 میکرولیتر از محصول PCR مربوط به هر مرحله از آزمایش در حضور مارکر 100 جفت بازی DNA (فرمنتاس- لیتوانی) روی ژل 5/1 درصد آگاروز واجد اتیدیوم بروماید در ولتاژ ثابت 90 ولت به مدت در حدود 45 دقیقه الکتروفورز و پس از مشاهده ژل به دست آمده با دستگاه ترانس لومیناتور UV (UVitech)، انگلستان، تصویر به دست آمده روی کاغذ حرارتی ثبت شد. .تجزیه و تحلیل آماری نتایج: دادههای حاصل از نتایج به دست آمده در این مطالعه با نرم افزار آماری SPSS ver.16 و مدلهای آماری مربع کای و دقیق فیشر در سطح اطمینان 95 درصد تحلیل شد.
جدول 1- توالی پرایمرهای مورد استفاده جهت ردیابی شایعترین ژنهای کدکننده مقاومت آنتیبیوتیکی در ایزولههای اسینتو باکتر بومانی
. نتایج همانگونه که در جدول 2 مشهود است از مجموع 500 نمونه اخذ شده از انواع عفونتهای بیمارستانی تعداد 121 نمونه (20/24 درصد)، آلوده به اسینتو باکتر بومانی بودند که در این میان بیشترین میزان آلودگی مربوط به نمونههای اخذ شده از خون (موارد باکتریمی) با 87/43 درصد و کمترین میزان مربوط به نمونههای اخذ شده از چرکها و آبسههای سطحی با 94/11 درصد آلودگی برآورد شد. تجزیه و تحلیل آماری نتایج نشانگر وجود اختلاف آماری معناداری تجزیه و تحلیل آماری اطلاعات مربوط به جدول بالا نشانگر وجود اختلاف آماری معنادار بین مقاومت آنتیبیوتیکی ایزولههای اسینتو باکتر بومانی به تتراسایکلین با سه آنتیبیوتیک کلرامفنیکل، نیتروفورانتوئین و مروپنم (012/0P value = )، بین مقاومت به تتراسایکلین و مقاومت به ایمی پنم و لووفلوکساسین (146/0P value = ) و نیز بین مقاومت به تری متوپریم با پنج آنتیبیوتیک کلرامفنیکل، نیتروفورانتوئین، مروپنم، ایمی پنم و لووفلوکساسین (321/0P value = ) بود. حضور شایعترین ژنهای کدکننده مقاومت به آنتیبیوتیکهای معمول در درمان عفونتهای بیمارستانی در انسان به روش PCR چندگانه ای بررسی شدند. همان گونه که در جدول 4 آورده شده است، فراوانی حضور ژنهای کدکننده مقاومت به تتراسایکلین (03/95 درصد) بیشترین و ژنهای کدکننده مقاومت به کلرامفنیکل (6/6 درصد) کمترین مقدار بود. در این میان ژنهای کدکننده مقاومت به کربنی سیلینها و اگزاسیلینها با 73/29 و 52/35 درصد از ایزولههای اسینتو باکتر بومانی جدا شده ردیابی شدند. تحلیل آماری اطلاعات جدول بالا نشانگر وجود اختلاف آماری معنا دار بین فراوانی حضور ژنهای tetA و tetB با سایر ژنهای مورد مطالعه تصاویر مربوط به الکتروفورز محصول PCR مربوط به تعدادی از ژنهای مورد مطالعه در شکل 1 نشان داده شده است:
شکل 1- ژل حاصل از الکتروفورز محصول PCR مربوط به ژنهای dfrA1 (قطعه 367 جفت بازی)، tetB (قطعه 634 جفت بازی)، aadA1 (قطعه 447 جفت بازی) و aac (3) -IV (قطعه 286 جفت بازی)، ستون M= مارکر 100 جفت بازی DNA، ستون 1= کنترل منفی
جدول 2- فراوانی ایزولههای اسینتوباکتر بومانی برحسب نوع نمونه بالینی
جدول 3- الگوی مقاومت آنتیبیوتیکی در ایزولههای اسینتو باکتر بومانی جدا شده از عفونتهای بیمارستانی
جدول 4- توزیع ژنهای کدکننده مقاومت به آنتیبیوتیکها در ایزولههای اسینتو باکتر بومانی جدا شده از عفونتهای بیمارستانی
. بحث و نتیجه گیری امروزه گسترش ژنهای مقاومت آنتیبیوتیکی با ایجاد مقاومتهای آنتیبیوتیکی چندگانه به مشکل مهمی در درمان عفونتهای حاصل از اسینتو باکترها تبدیل شده است (18). مطالعات مختلف نشان داده که اسینتو باکتر بومانی به بیشتر آنتیبیوتیکهای بتالاکتام و کینولونها مقاوم بوده و مقاومت آن به آمینوگلیکوزیدها نیز در حال افزایش است (19). مطالعه حاضر با هدف تعیین الگوی مقاومت آنتیبیوتیکی ایزولههای اسینتو باکتر بومانی جدا شده از عفونتهای بیمارستانی با دو روش معمول آنتی بیوگرام و ردیابی ژنهای کدکننده مقاومت آنتیبیوتیکی (به روش PCR) انجام گرفت و مشخص شد که تمام ایزولههای مورد بررسی دارای مقاومت آنتیبیوتیکی چندگانه بودهاند و به آنتیبیوتیکهای استرپتومایسین، جنتامایسین، تتراسایکلین، تری متوپریم و کوتریموکسازول مقاوم هستند؛ اما تمام آنها نسبت به سه آنتیبیوتیک کلرامفنیکل، نیتروفورانتوئین و مروپنم حساس بودند که در مطالعه انجام شده توسط کارولوسکی[x] و همکاران در فاصله سالهای 1998 تا 2001 این امر به اثبات رسیده و آنها نیز حساسیت ایزولههای اسینتو باکتر به مروپنم را 90 درصد گزارش کردهاند (20). در مطالعهای که توسط آیان[xi] و همکاران در سال 2003 انجام گرفت مشخص شد که از 52 سویه مورد مطالعه، همه ایزولهها به پیپراسیلین، تازوباکتام، تیکارسیلین-کلاولانیک اسید، سفپیم، سفوتاکسیم، سفتازیدیم، سفتریاکسون، جنتامایسین و آزترونام مقاوم بوده و مقاومت به توبرامایسین، سیپروفلوکساسین، آمپی سیلین- سولباکتام، کوتریموکسازول و آمیکاسین به ترتیب در 5، 8، 55، 66 و 74 درصد ایزولهها مشاهده شد (21). مطالعهای که توسط باسوستاگلو[xii] و همکاران در سال 2001 به منظور بررسی ویژگیهای اپیدمیولوژیک سویههای اسینتو باکتر بومانی انجام گرفت نشان داد که از 32 ایزوله اسینتو باکتر بومانی مورد بررسی، همه ایزولهها به ایمی پنم حساس بودند که با نتایج این پژوهش مطابقت دارد (22). در مطالعهای که توسط اسمولیلکوو[xiii] و همکاران به منظور بررسی عفونتهای ناشی از اسینتو باکتر بومانی با مقاومت دارویی چندگانه انجام گرفت مشخص شد که 93 درصد سویهها به ایمی پنم و 100 درصد سویهها به کلیستین و آمپی سیلین- سولباکتام حساس میباشند (23). در مطالعه وانگ[xiv] و همکاران در سال 2003 که بر روی اپیدمیهای ناشی از اسینتو باکتر بومانی مقاوم به دارو در بخش ICU انجام گرفت، مشخص شد که تمام سویهها به آزترونام، آمیکاسین، آمپی سیلین- سولباکتام، سفتازیدیم، سفپیم، سیپروفلوکساسین، جنتامایسین، ایمی پنم، مروپنم، پیپراسیلین- تازوباکتام و تیکارسیلین- کلاولانیک اسید مقاوم و به پلی میکسین حساس هستند (24). در مطالعه ما 6/87 درصد سویهها به آمیکاسین حساس بودند که در این مورد نتایج پژوهش حاضر با نتایج پژوهش وانگ و همکاران مطابقت ندارد. همچنین برخلاف مطالعه اسمولیاکوو در مطالعه وانگ تمام سویهها به ایمی پنم و آمپی سیلین -سولباکتام مقاوم بودند (23 و 24). میرنژاد[xv] و همکاران در مطالعه انجام شده در سال 1390 نشان دادند که مروپنم و توبرامایسین مؤثرترین آنتیبیوتیک در درمان عفونتهای بیمارستانی ناشی از اسینتوباکتر بومانی بوده در حالی که ایزولههای مورد بررسی مقاومت بسیار بالایی در برابر سفپیم و آمیکاسین نشان دادند (25). در مطالعهای که در سال 2008 در ترکیه انجام شد، میزان مقاومت نسبت به پییراسیلین، پیپراسیلین- تازوباکتام، سیپروفلوکساسین و سفتازیدیم به ترتیب 100، 4/92، 3/83 و 2/74 درصد بود و مقاومت بالایی نیز نسبت به سایر آنتیبیوتیکها گزارش شد (26)، در حالی که در مطالعه کای[xvi] و همکاران در سال 2012 از مجموع 176 ایزوله اسینتو باکتر، 128 ایزوله MDR بوده اند که از میان آنها 63/90 درصد به ایمی پنم و 31/95 درصد به مروپنم مقاوم بوده اند اما در عین حال تنها 63/15 درصد نسبت به سیپروفلوکساسین مقاومت داشتند (27). کرباسی زاده و حیدری [xvii] در بررسی الگوی مقاومت آنتیبیوتیکی 50 ایزوله اسینتوباکتر بومانی جدا شده از بخش مراقبتهای ویژه در شهر اصفهان نشان دادند که 85 درصد ایزولهها دارای مقاومت آنتیبیوتیکی چندگانه هستند (28). طالبی طاهر[xviii] و همکاران از 51 نمونه خلط مورد مطالعه 35 ایزوله اسینتوباکتر جدا کردند که درصد بالایی از ایزولهها به ایمی پنم، پیپراسیلین، تازوباکتام، سفالوسپورینهای نسل سوم و جنتامایسین مقاوم بوده و نتیجه گرفتند که مقاومت آنتیبیوتیکی در گونههای اسینتوباکتر رو به افزایش بوده و اقدامات پیشگیری کننده سریع انجام شود (29). در بخش ردیابی ژنهای کدکننده مقاومت آنتیبیوتیکی ژنهای tetAوtetB با فراوانی 04/95 درصد شایعترین ژنهای ردیابی شده در ایزولههای مورد مطالعه بودند. ژنهای کدکننده مقاومت به کربنی سیلینها (vim، sim وimp) و اکساسیلینها (، Oxa-51-lik، Oxa-23-lik، Oxa-24-likوOxa-58-lik) در 53/35 و 36/36 درصد از ایزولههای اسینتو باکتر بومانی جدا شده حضور داشتند. در مطالعه انجام شده توسط هوجر[xix] و همکاران فراوانی حضور ژنهای blaADCو blaOXA-like، 99 و 97 درصد بود که در مقایسه با این پژوهش بیشتر بود. در این مطالعه ژنهایaacC1، apha6، aadB و aadA1در 56، 71، 48 و 39 درصد از ایزولهها ردیابی شد (6). در حالی که در مطالعه حاضر ژن aadA1 در 33/88 وaac (3) -IV در 56/19 درصد از ایزولههای مورد مطالعه حضور داشت. نمک[xx] و همکاران با ردیابی ژنهای کدکننده مقاومت به آمینوگلیکوزیدها در 101 ایزوله اسینتو باکتر بومانی نشان دادند که ژنهای aacC1 و aadA1 در 68 ایزوله، ژن apha6 در 55 ایزوله و ژن aadB در 31 ایزوله وجود دارند (30). فراهانی خلت آبادی[xxi] و همکاران (1387) الگوی مقاومت آنتیبیوتیکی وتوزیع ژن های کدکننده مقاومت آنتیبیوتیکی در گونههای اسینتوباکتر جدا شده از بیمارستان شهید بهشتی کاشان را مطالعه کردند. در این بررسی 48 ایزوله اسینتوباکتر بومانی، 6 ایزوله اسینتوباکتر لوفی و 6 ایزوله از سایر گونههای اسینتوباکتر از بیماران جدا شد. گونه های اسینتوباکتر به ترتیب بیشترین مقاومت را به آمیکاسین، توبرامایسین، سفتازیدیم، سیپروفلوکساسین، پیپراسیلین-تازوباکتام، داکسی سیکلین، تریمتوپریم/ سولفامتوکسازول، مینوسیکلین، لووفلوکساسین، ایمی پنم و سولباکتام/ آمپی سیلین نشان دادند. مقاومت به چند آنتیبیوتیک در 7/66 درصد ایزولهها دیده شد. میزان حضور ژن های، aphA6، aacC1، ADC-7، OXA SET C، aadA1 و aadB، به ترتیب 39 (65 درصد)، 38 (2/63 درصد)، 34 (7/56 درصد)، 32 (3/53 درصد)، 25 (7/41 درصد) و 2 (3/3 درصد) گزارش شد (31). علت اختلاف در الگوی مقاومت آنتیبیوتیکی تعیین شده در این مطالعه با مطالعات مشابه انجام شده در ایران و خارج از ایران میتواند مربوط به تفاوت در نوع نمونه بالینی اخذ شده، تعداد نمونههای مورد مطالعه، روش نمونه گیری، نوع مطالعه طراحی شده، منطقه جغرافیایی و شرایط آب و هوایی منطقه، اولویت در تجویز آنتیبیوتیکهای مختلف توسط پزشکان منطقه و در دسترس بودن آنتیبیوتیکهای مختلف باشد. در پایان به این موضوع باید اشاره کرد که آنچه در بیشتر مطالعات به چشم میخورد، این است که بیشتر ایزولههای اسینتو باکتر به سفالوسپورینهای نسل سوم، تیکارسیلین- آزترونام و تیکارسیلین- کلاولانیک اسید مقاوم و به کلیستین حساس هستند. با توجه به این که در کشور ما مطالعات کمی در رابطه با ویژگیهای اپیدمیولوژیک و الگوی مقاومت دارویی ایزولههای اسینتو باکتر بومانی انجام گرفته است، توجه به نقش این باکتری به عنوان یک عامل بالقوه خطرناک در عفونتهای بیمارستانی ضروری به نظر میرسد. تشکر و قدردانی نویسندگان مقاله از زحمات مدیریت محترم بخش عفونی بیمارستانهای مورد مطالعه و کارشناس محترم آزمایشگاه میکروبشناسی دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد جناب آقای مهندس منوچهر مومنی تشکر و قدردانی میکنند. [1]- PCR buffer 10X [2]- MgCl2 [3]- Taq DNA Polymerase [4]- Clinical and Laboratory Standards Institute [5] - DNA Genomic Purification Kit [6] - Fermentas-Lithuania [7]- Multiplex PCR [8]- Thermo Cycler (Eppendorf, Mastercycler ® 5330, Eppendorf- Netheler- Hinz GmbH, Hamburg, Germany) [9]- Cerebral Spinal Fluid (CSF) [x]- Karlowsky [xi]- Ayan [xii]- Basustaoglu [xiii]- Smolyakov [xiv]- Wang [xv]- Mirnejad [xvi]- Cai [xvii]- Karbasizade and Heidary [xviii]- Talebi-Taher [xix] -Hujer [xx]- Nemec [xxi] -Farahani Kheltabadi | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| مراجع | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(1) Wang H., Guo P., Sun H., Wang H., Yang Q., Chen M., et al. Molecular epidemiology of clinical isolates of carbapenem-resistant Acinetobacter spp. from Chinese hospitals. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2007; 51 (11): 4022- 8.(2) Gordon NC., Wareham DW. Multidrug-resistant Acinetobacter baumannii: mechanisms of virulence and resistance. International Journal of Antimicrobial Agents 2010; 35 (3): 219- 26. (3) Bou G., Cerveró G., Domínguez MA., Quereda C., Martínez-Beltrán J. Characterization of a nosocomial outbreak caused by a multiresistant Acinetobacter baumannii strain with a carbapenem-hydrolyzing enzyme: high-level carbapenem resistance in A. baumannii is not due solely to the presence of beta-lactamases. Journal of Clinical Microbiology2000; 38 (9): 3299- 305.(4) Bergogne-Bérézin E., Towner KJ. Acinetobacter spp. as nosocomial pathogens: microbiological, clinical, and epidemiological features. Clinical Microbiology Reviews 1996; 9 (2): 148- 65. (5) Coelho J., Woodford N., Turton J., Livermore DM. Multiresistant acinetobacter in the UK: how big a threat? Journal of Hosptal Infection 2004; 58 (3): 167- 9.(6) Jin H., Xu XM., Mi ZH., Mou Y., Liu P. Drug-resistant gene based genotyping for Acinetobacter baumannii in tracing epidemiological events and for clinical treatment within nosocomial settings. Chinese Medical Journal 2009; 122 (3): 301- 6.(7) Hujer KM., Hujer AM., Hulten EA., Bajaksouzian S., Adams JM., Donskey CJ., et al. Analysis of antibiotic resistance genes in multidrug-resistant Acinetobacter sp. isolates from military and civilian patients treated at the Walter Reed Army Medical Center. Antimicrobal Agents and Chemotherapy2006; 50 (12): 4114- 23.(8) Chiang MC., Kuo SC., Chen YC., Lee YT., Chen TL., Fung CP. Polymerase chain reaction assay for the detection of Acinetobacter baumannii in endotracheal aspirates from patients in the intensive care unit. Journal of Microbiology, Immunology and Infection 2011; 44 (2): 106- 10.(9) Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility testing; 20th informational supplement. CLSI/ NCCLS M100-S20. Clinical and Laboratory Standards Institute, Wayne, Pa, 2010.
(10) Najafipour S., Jafari S., Kargar M., Abdollahy A., Mardaneh J., Fasihy Ramandy M., et al. Phenotypical Evaluation of Multi-Drug Resistant Acinetobacter Baumannii: Original Article. Journal of Fasa University of Medical Sciences 2012; 2 (4): 254- 8. (11) Moosavian M., Shoja S., Peymani A., Tabatabaiefar MA., Rostami S., Ebrahimi N. Genotyping of carbapenem resistant Acinetobacter baumannii isolated from tracheal tube discharge of hospitalized patients in intensive care units, Ahvaz, Iran. Iranian Journal of Medical Microbiology 2013; 5 (4): 315-22. (12) Van TT., Chin J., Chapman T., Tran LT., Coloe PJ. Safety of raw meat and shellfish in Vietnam: an analysis of Escherichiacoli isolations for antibiotic resistance and virulence genes. International Journal of Food Microbiology2008; 124 (3): 217- 23. (13) Randall LP., Cooles SW., Osborn MK., Piddock LJ., Woodward MJ. Antibiotic resistance genes, integrons and multiple antibiotic resistance in thirty-five serotypes of Salmonellaenterica isolated from humans and animals in the UK. Journal of Antimicrobal Chemotherapy 2004; 53 (2): 208- 16.(14) Toro CS., Farfán M., Contreras I., Flores O., Navarro N., Mora GC., et al. Genetic analysis of antibiotic-resistance determinants in multidrug-resistant Shigella strains isolated from Chilean children. Epidemiology & Infection 2005; 133 (1): 81- 6.(15) Mammeri H., Van De Loo M., Poirel L., Martinez-Martinez L., Nordmann P. Emergence of plasmid-mediated quinolone resistance in Escherichia coli in Europe. Antimicrobal Agents and Chemotherapy 2005; 49 (1): 71- 6.(16) Mendes RE., Kiyota KA., Monteiro J., Castanheira M., Andrade SS., Gales AC., et al. Rapid detection and identification of metallo-beta-lactamase-encoding genes by multiplex real-time PCR assay and melt curve analysis. Journal of Clinical Microbiology2007; 45 (2): 544- 7.(17) Woodford N., Ellington MJ., Coelho JM., Turton JF., Ward ME., Brown S., et al. Multiplex PCR for genes encoding prevalent OXA carbapenemases in Acinetobacter spp. International Journal of Antimicrobial Agents 2006; 27 (4): 351- 3.(18) Garnacho-Montero J., Amaya-Villar R. Multiresistant Acinetobacter baumannii infections: epidemiology and management. Current Opinionin Infectious Diseases 2010; 23 (4): 332- 9.(19) Van Looveren M., Goossens H.; ARPAC Steering Group. Antimicrobial resistance of Acinetobacter spp. in Europe. Clinical Microbiology and Infectious 2004; 10 (8): 684- 704.(20) Karlowsky JA., Draghi DC., Jones ME., Thornsberry C., Friedland IR., Sahm DF. Surveillance for antimicrobial susceptibility among clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii from hospitalized patients in the United States, 1998 to 2001. Antimicrobal Agents and Chemotherapy 2003; 47 (5): 1681- 8.(21) Ayan M., Durmaz R., Aktas E., Durmaz B. Bacteriological, clinical and epidemiological characteristics of hospital-acquired Acinetobacterbaumanniiinfection in a teaching hospital. Journal of Hosptal Infection 2003; 54 (1): 39- 45.(22) Basustaoglu AC., Kisa O., Sacilik SC., Ozyurt M., Yildiran ST. Epidemiological characterization of hospital-acquired Acinetobacterbaumannii isolates from a 1500-bed teaching hospital by phenotypic and genotypic methods. Journal of Hosptal Infection2001; 47 (3): 246- 7.(23) Smolyakov R., Borer A., Riesenberg K., Schlaeffer F., Alkan M., Porath A., et al. Nosocomial multi-drug resistant Acinetobacterbaumannii bloodstream infection: risk factors and outcome with ampicillin-sulbactam treatment. Journal of Hosptal Infection 2003; 54 (1): 32- 8.(24) Wang SH., Sheng WH., Chang YY., Wang LH., Lin HC., Chen ML., et al. Healthcare-associated outbreak due to pan-drug resistant Acinetobacter baumannii in a surgical intensive care unit. Journal of Hosptal Infection 2003; 53 (2): 97- 102.(25) Mirnejad R., Mostafavi S., Masjedian F. Role of Class 2 Integron in Antibiotic Susceptibility Pattern of Acinetobacter baumannii Strains Isolated from Hospitals in Tehran. Scientific Journal of Hamadan University of Medical Sciences 2012; 18 (4): 22- 9. (26) Baran G., Erbay A., Bodur H., Ongürü P., Akinci E., Balaban N., et al. Risk factors for nosocomial imipenem-resistant Acinetobacterbaumannii infections. International Journal of Infectious Diseases2008; 12 (1): 16- 21.(27) Cai Y., Chai D., Wang R., Liang B., Bai N. Colistin resistance of Acinetobacter baumannii: clinical reports, mechanisms and antimicrobial strategies. Journal ofAntimicrobial Chemotherapy2012; 67 (7): 1607- 15. (28) Karbasizade V., Heidari L. Antimicrobial Resistance of Acinetobacter Baumannii Isolated from Intensive Care Units of Isfahan Hospitals, Iran. Journal of Isfahan Medical School 2012; 30 (191): 759- 63. (29) Talebi-Taher M., Latifnia M., Javad-Moosavai SA., Adabi M., Rastgar Lari A., Abdizadeh MF., et al. Risk factors and antimicrobial susceptibility in ventilator associated pneumonia: a brief report. Tehran University Medical Journal2012; 70 (9): 577- 82. (30) Nemec A., Dolzani L., Brisse S., van den Broek P., Dijkshoorn L. Diversity of aminoglycoside-resistance genes and their association with class 1 integrons among strains of pan-European Acinetobacterbaumannii clones. Journal of Medical Microbiology 2004; 53 (Pt 12): 1233- 40. (31) Farahani Kheltabadi R., Moniri R., Shajari GR., Nazem Shirazi MH., Musavi SGA., Ghasemi A., et al. Antimicrobial Susceptibility patterns and the distribution of resistance genes among Acinetobacter species isolated from patients in shahid Beheshti hospital, Kashan. Feyz Journal of Kashan University of Medical Sciences 2009; 12 (4): 61- 7. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 4,990 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 7,054 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||